超微量分光光度计的比色法
那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下关于超微量分光光度计的比色法：
BCA、Lowry、Bradford都是通过比色来检测非纯蛋白的浓度的方法。比色法检测蛋白浓度时必须构建一个标准曲线，因此将这三种测量蛋白的方法集合在比色法中。
BCA是一种通过比色来检测非纯蛋白的浓度的方法，它通常用于稀释的蛋白浓度检测以及那些含有在紫外区域有光吸收的杂质的蛋白的浓度检测。BCA法是检测Cu+1离子的方法，在碱性环境下，Cu＋2离子会被蛋白还原为Cu+1离子。两个联喹啉二羧酸BCA分子和一个 Cu+1离子形成紫色的螯合物这样在有蛋白存在情况下，Cu-BCA形成的螯合物在562nm出有*大光吸收，以750nm光系数为标准化。
商业化的BCA试剂盒有两种蛋白检测范围：
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为20:1，这个试剂盒检测范围从0.20mg/到8.0mg/ml（BSA）。当使用基座检测时，推荐使用4ul 样品和80ulBCA试剂。
微量检测使用1：1试剂/样品，可以检测蛋白浓度范围从0.01mg/ml至0.20mg/m要准备足够的样品来做基座检测，建议使用10ul样品和10ulBCA试剂（使用P管）。
按照试剂盒厂家建议的操作来构建标准曲线和样品准备。确保在所有检测过程使用相同的时间和温度。
注意：如果试验温度高于60度，*好使用2倍的试验体积，避免挥发导致样品减少，从而影响测试结果。
Lowry法蛋白定量是一个应用非常广泛的蛋白定量方法。Lowry法是蛋白与硫酸铜在碱性环境下反应形成铜-蛋白复合物。Folin－Ciocalteu试剂可以有效的还原铜复合物，产生与蛋白量成比例的蓝色产物，可以在650nm检测，405nm处校准。试验中使用的试剂可以从多个厂家购买。
要准确准备标准品，推荐使用20ul的蛋白样品和100ul的Lowry试剂来做反应。在本仪器上可以检测的样品浓度范围是从0.20mg/ml到4mg/ml。按照试剂盒生产厂家的说明来准备标准品和样品。在所有操作过程中要保持每个样品处理时间和环境温度一致。由于本仪器基座检测的浓度范围比常规检测更大，在构建标准曲线时需要构建比厂家建议更宽的标准曲线范围。检测需要的样品量推荐使用2ul。
Bradford是常用的蛋白定量的方法。它通常用于浓度比较低的蛋白的浓度检测。Bradford法是根据蛋白能够使考马斯亮蓝尝试吸收位移来检测蛋白浓度的，一般在595nm处检测吸光度。蛋白-染料复合物在595nm处检测并在750nm处做标准化。可以从多个厂家购买相应的试剂盒。
商业化的 Bradford 试剂盒有两种蛋白检测范围：
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为50:1，这个试剂盒检测范围从0.10mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。*佳线形范围在0.01-1mg/ml。当使用基座检测时，推荐使用4ul 样品和200ul Bradford 试剂。
微量检测使用1：1 试剂/样品，可以检测蛋白浓度范围从15ug/ml 至125ug/ml。要准备足够的样品来做基座检测，建议使用10ul 样品和10ulBCA 试剂（使用PCR管）。按照试剂盒厂家建议的操作来构建标准曲线和样品准备。确保在所有检测过程中使用相同的时间和温度。
注意：如果试验温度高于60度，*好使用2倍的试验体积，避免挥发导致样品减少，从而影响测试结果。
在Bradford试剂盒中同样包括用于构建标准曲线的标准品。由于本仪器能够检测比常规比色皿检测更高的浓度，用户需要使用比厂家推荐的标准品更高的浓度。
比色法检测
注意：比色法检测进行样品检测前，需要建立标准曲线！
超微量分光光度计维护保养秘诀
超微量分光光度计是精密光学仪器，出厂前经过精细的装配和调试，如果能对仪器进行恰当的维护和保养，不仅能保证仪器的可靠性和稳定性，也可以延长仪器使用寿命。
超微量分光光度计常用于定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的*高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。
超微量分光光度计是精密光学仪器，正确安装、使用和保养对保持仪器良好的性能和保证测试的准确度有重要作用。下面分享一些超微量分光光度计不可不知的保养常识。
(1)仪器工作环境的要求
超微量分光光度计对工作环境的要求如下。
①仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5～35℃．相对湿度不超过85％。
②仪器应放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的振动或持续的振动。
③室内照明不宜太强，且应避免直射日光的照射。
④电扇不宜直接向仪器吹风，以防止光源灯因发光不稳定而影响仪器的正常使用。
⑤尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
⑥供给仪器的电源电压为AC 220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。推荐使用功率为1000w以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器，以加强仪器的抗干扰性能。
⑦避免在有硫化氢等腐蚀性气体的场所使用。
(2)仪器的日常维护和保养
①光源。光源的寿命有限，为了延长光源使用寿命，在不使用仪器时不要开光源灯，应尽量减少开关次数。在短时问的工作间隔内可以不关灯。刚关闭的光源灯不能立即重新开启。
仪器连续使用时间不应超过3h。若需长时间使用，*好间歇30min。如果光源灯亮度明显减弱或不稳定，应及时更换新灯。更换后要调节好灯丝位置，不要用手直接接触窗口或灯泡，避免油污沾附。若不小心接触过，要用无水乙醇擦拭。
②单色器。单色器是仪器的核心部分，装在密封盒内，不能拆开。选择波长应平衡地转动，不可用力过猛。为防止色散元件受潮生霉，必须定期更换单色器盒干燥剂(硅胶)。若发现干燥剂变色，应立即更换。
③吸收池。必须正确使用吸收池，应特别注意保护吸收池的两个光学面。
④检测器。光电转换元件不能长时间曝光，且应避免强光照射或受潮积尘。
⑤当仪器停止工作时，必须切断电源。
⑥为了避免仪器积灰和沾污，在停止工作时，应盖上防尘罩。
⑦仪器若暂时不用要定期通电，每次不少于20～30min，以保持整机呈干燥状态，并且维持电子元器件的性能。
以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于超微量分光光度计的比色法。
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