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液相色谱柱正确使用方法
一、样品方面
1.除去微粒及杂质
2.了解样品在流动相中的溶解度
如溶样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,防止其在流动相中析出
3.了解样品与色谱柱的基质/填料是否有相互作用
二、流动相方面
1.除去微粒
纯度的要求:超纯水,梯度实验时水中有机杂质含量要低;缓冲液的PH值,在填料的允许范围内;缓冲液(盐)的浓度;有机溶剂:色谱纯,杂质含量尽量低,并与填料相匹配
2.流动相对样品的溶解度
有机溶剂或水的比例
三、色谱柱的清洗
对所做的样品要有充分的了解,用对该样品洗脱能力强的流动相清洗
硅胶柱的一般方法是先用甲醇洗去极性杂质,然后用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化
键合相柱(烷基)的一般方法是用20倍体积的甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗
(记住:每种色谱柱可能性有特定的方法,一定要先看其使用说明!)
四、色谱柱的存放
存放前的处理要除去杂质、缓冲盐
合适的存放溶剂
避免色谱柱床的干涸
避免机械震动
防止**生长
注意存放的温度
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