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普通生物显微镜的使用方法及其注意事项

一、显微镜的使用方法
㈠准备工作:首先将显微镜的工作台擦干净,然后将要观察的标本和各种器具准备好。
㈡显微镜的使用
⒈取用:将显微镜从镜箱取出,取出时一手握镜臂,一手托底座将其轻放在离工作台边缘8-10厘米处,偏左的位置。
⒉低倍镜的使用
⑴对光:对光前,先安上合适的目镜(一般采用10×目镜),将10×、40×、100×物镜按照顺时针安在物镜转换器上,逆时针转动转换器使10×物镜对准载物台中央的通光孔。从目镜中观察,同时调节反光镜或接通电源,直至视场明亮、均匀为止。
使用双目显微镜对双目镜宽度要进行调节,用推或拉的方法调节两目镜之间的距离,直到在两个目镜上双眼同时观察时,两个图形的视场正好完全重合,此时镜筒刻度盘上所示的数字,就是观察者两眼瞳孔之间的距离。
根据物镜的放大倍数调节聚光镜的高度,使用油镜时由于放大倍数大,镜像亮度小,需要较强的照明,需要将聚光镜升至高处。
调节可变光阑(光圈)使聚光镜的镜口率与物镜的镜口率一致,才能充分发挥舞静的分辨率,方法为:将显微镜调整到工作状态后,从目镜筒中拔出目镜,一边观察(向拔出目镜的目镜筒里看),一边缩小光阑,这时可看到缩小的光阑被物镜成的像,然后逐渐调大光阑,当光阑像的边缘与物镜通光孔黑圈的边缘一致时停止,这时的聚光镜镜口率与物镜镜口率就一致了。如显微镜可变光阑圆框上刻有表示口径的标尺,可调至物镜镜口率的80%,即物镜镜口率为0.65,则可变光阑的标尺调至0.65×80%=0.52即可。
⑵观察:将标本放置在载物台上,使标本对准通光孔正中,下降镜筒或升高载物台,并从侧面观察,使物镜下端和标本逐渐接近,但不能碰到盖玻片。从目镜观察,用粗准焦螺旋慢慢升起镜筒和下降载物台直到看到标本为至,再调节细准焦螺旋至物像清晰。
⒊高倍镜的观察
在低倍镜下,找到要进一步观察的部位,移至视野中心,再上升聚光镜、逆时针转动物镜转换器换上高倍镜。合格的显微镜操作距离是由低倍镜转换到高倍镜时刚好合用的,一般稍为调节一下细准焦螺旋即可看到清晰的物像。
⒋油镜的观察
在高倍镜下看到标本后,把需要进一步放大的部位移至视野中心。上升镜筒或下降载物台约1.5厘米。将物镜转离光轴,在盖玻片所要观察的部位上滴一滴香柏油,把光阑升至大。换上油镜,小心调节粗准焦螺旋,使油镜慢慢下降或慢慢上升载物台,从侧面观察油镜下端与标本之间的距离,当油镜的下端开始触及油滴时即可停止。从目镜观察,调节细准焦螺旋,直至看清标本物像。
观察完毕,上升镜筒或下降载物台,将油镜转离光轴,用干的擦鏡纸轻轻地吸掉油镜和盖玻片上的油,再用浸湿二甲苯的擦鏡纸擦拭两三次,后用干净的擦鏡纸再擦拭两三次。
㈢观察后的处理工作
清洁:显微镜上的污物(残物或灰尘),用擦鏡纸擦干净,若擦不干净可蘸少许二甲苯进行擦拭。
显微镜各部分的放置:擦完后,把物镜转离光轴,把反光镜转到与载物台垂直的方向,以减少灰尘粘落上面,而后罩上鏡套,小心的放回鏡箱内,保存备用。
二、使用显微镜时应注意的事项
⒈取放时动作一定要轻,切忌震动和暴力,否则会造成光轴偏斜而影响观察,而且光学玻璃也容易损坏。
⒉由于物镜的螺丝口容易损伤,安装物镜时要特别小心,即先向左方倒转一小段,凹凸双方吻合后再向右方旋转,不要转的太紧,轻轻捻到头,再稍紧即可。
⒊鏡检标本应严格按照操作程序进行,观察时要从低倍镜开始,看清标本后再转用高倍镜、油镜。
⒋使用油镜时一定要在盖玻片上滴油后才能使用。油镜使用完后,应立即将镜头、盖玻片上的油擦干净,否则干后不易擦去,以致损伤镜头和标本。但应注意二甲苯用量不可过多,否则,物镜中的树胶溶解,透镜歪斜甚至脱落,盖玻片移动甚至连同标本一起融掉。
⒌使用时不可用手摸光学玻璃部分,如需擦拭应严格按照光学部件擦拭办法。
⒍使用的盖玻片和载玻片不能过厚或过薄。标准的盖玻片为0.17±0.02毫米,载玻片为1.1±0.04毫米。过厚或过薄将会影响显微镜成像及观察。
三、生物显微镜的擦拭和保养
㈠擦拭
⒈光学部分的擦拭
顺序:吸耳球吹――毛笔、刷子和羽毛轻刷――擦鏡纸轻擦——擦鏡纸蘸二甲苯轻擦。
镜头表面发霉和发雾可用擦鏡纸蘸少量酒精乙醚混合液(3:7)轻擦。内表面发霉和发雾,一般无法**,所以严防发生。
⒉机械部分的擦拭
用干净的软布擦拭,或用擦鏡纸蘸二甲苯轻擦,不得用酒精和乙醚,因为这些试剂会侵蚀油漆,容易把油漆擦掉。
㈡保养
防潮、防尘、防腐蚀、放热
四、检过程中常出现的问题及其分析解决的途径
问 题
原    因
解  决  方  法
视野不亮
调节反光镜对光源的角度
 
灯泡、光源变压器或保险管是否烧坏
更换烧坏部件
视野照明不均匀
聚光镜是否在光路中央的正确位置
低倍镜下,关闭可变光阑,靠调中螺旋把光束调中
物镜是否转到光路中的正确位置
转入正确位置
透镜上有无指纹或油渍
擦鏡纸蘸二甲苯擦拭所有外露透镜
所有物镜均难以调焦
目镜表面生霉
更换目镜
细准焦螺旋是否调至极限
改变起位置至可调范围中间
是否标本太厚,厚薄不均
换较薄均匀清晰的标本
标本正面朝下
 
高倍镜和油镜难于调焦
盖玻片厚度是否正确
换标准盖玻片
聚光器是否处于正确位置和正确聚焦
调节聚光镜位置和聚焦
利用合适的油镜浸没油镜检查
 
高倍镜和油镜下难于找到标本
用低倍镜准确地把标本移到视野的中央,然后用高倍镜或油镜把标本调中
 
视野中所见到的图象有污物、霉斑或人工假象
当转动目镜时鏡内霉斑或污物是否随之转动
清洁目镜
清洁物镜
检查载玻片和盖玻片之间是否有气泡
移去盖玻片重新封片
是否看到清晰黑**限的环状物
存在小气泡

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