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浅谈凝胶成像分析系统组成及各部件性能
凝胶成像系统
的基本骨包含:CCD相机,暗室和分析软件。不过其功能不仅**于对琼脂糠凝胶进行成像,现在的成像仪趋向于多功能化,还适用于蛋白胶、发荧光的胶、印迹膜和菌落平板等应用。
在Western Blot方面,高性能的CCD分子成像系统能与胶片媲美。 CCD是电荷耦合器件(Charge Coupled Device)的英文名称缩写,是一种光电转换器件。是凝胶图像系统的**部件。绝大多数对数码相机都有一定的了解,不少人还是这方面的专家。有人把数码相机的像素看得很重,但比较之后发现,有些400万、500万像素的相机拍出来的片子没有300像素的机子拍出来的好,这是为什么?
其实,影响凝胶成像的因素很多,衡量CCD好坏的指标,有分辨率,CCD尺寸,动态范围,灵敏度,量子效率,信噪比等,其中像素数以及CCD尺寸是重要的指标。其实是说感光器件的面积大小,这里就包括了CCD感光器件的面积越大,也即CCD面积越大,捕获的光子越多,感光性能越好,信噪比越低。 为了方便您更了解CCD的大小,现列举目前市场上所应用的CCD规格如下:
1英寸——靶面尺寸为宽12.7mm*高9.6mm,对角线16mm。
2/3英寸——靶面尺寸为宽8.8mm*高6.6mm,对角线11mm。
1/2英寸——靶面尺寸为宽6.4mm*高4.8mm,对角线8mm。
1/3英寸——靶面尺寸为宽4.8mm*高3.6mm,对角线6mm。
1/4英寸——靶面尺寸为宽3.2mm*高2.4mm,对角线4mm。
CCD的分辨率由低到高: 133万左右,300万左右,500万左右,甚至还有更高的,根据CCD的温度有可以分为常温CCD相机和制冷CCD相机,制冷CCD:在相同满井电子的CCD,降低CCD噪音,就能提高CCD的监测能力,热或者暗电流对于CCD都是噪音,噪音在Cool CCD基本都可以被深度致冷的Peltier消除。在曝光超过5-10秒,CCD芯片就会发热,没有致冷设备的芯片,“热”或者白的像素点就会遮盖图像,图像到处可见雪花。CCD结构设计、数字化的方法等都会影响噪音的产生。当然通过改善凝胶成像系统结构、优化方法,同样能减少噪音的产生。
荧光及化学发光本身较弱,所以对CCD噪音的降低要求很高,应选用高分辨率数字冷却CCD相机结合高通透镜头系统,使其能够捕获到信号极其微弱的荧光及化学发光样品图像,并且能够大程度的降低噪音,减少背景,出色的图像清晰度。另外可选激发光源及多位滤镜轮扩大了荧光/
化学发光成像
的应用范围。所以一般在荧光及化学发光观察时需要选择制冷CCD。所以制冷CCD相机是分子影像成像分析系统的未来的发展趋势和必须要求。
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