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蛋白纯化通用问题（一）

那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下蛋白纯化通用问题（一）。

1、层析柱的寿命多久，可以用多长时间？
答：填料的使用次数依据不同的目的和条件而有差异。在使用过程中注意操作规范，定期清洁维护，可以使柱子保持*佳状态。

2、柱子堵了，超压如何处理？
答：可能原因：缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞；流速过快、流动相粘度 ( 如乙醇等 ) 过高、温度过低。
建议处理方法：首先将柱子卸下来，确定是系统还是柱子堵了。如果是柱子堵了：参考说明书 CIP 操作进行清洁；更换层析柱顶端滤膜或超声清洗。测定柱效或重复之前做过的样品。后续，注意样品前处理 ( 如核酸的去除、样品缓冲液条件 ) 以及层析柱的日常维护。

3、如何去除样品中的 DNA/RNA 等核酸杂质污染？
答：延长超声时间以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同时消化 DNA 和 RNA。如果来源是大肠杆菌裂解液，含有大量的DNA，可以用链霉素沉淀等方法，预先去除大量的 DNA。
通过层析方法去除：由于核酸带负电，在阴离子柱上会结合或阳离子柱上流穿，也可以有效去除核酸。
去除填料上结合的核酸：一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 对核酸的去除效果较好（需要确认填料是否可耐受NaOH）。如果核酸的吸附过强，会采用强烈的方法，3M 氯化钠去除靠静电吸附的核酸，然后用 1M 的氢氧化钠分解核酸，之后再用 3M NaCl 清洗。
可用Heparin预装柱或者填料：如果样品是核酸结合蛋白，Heparin可结合核酸结合蛋白，从而使核酸流穿。货号：17040601，17099801

4、柱子进气泡或跑干了，怎么办？
答：可能的原因：环境温度变化；缓冲液未经过脱气；层析柱连接系统或操作不当。
建议处理方法：用大量脱气去离子水或 20% 乙醇反向高速冲洗层析柱，直到小气泡被带出 ( 冲洗过程建议在系统连接反压阀之后进行）。如果大量进气，建议重新装柱。

5、不同样品检测的吸光度值？
答：蛋白样品*大吸收值一般在 280 nm，核酸或病毒在 254 nm或 260 nm ；多肽 215 nm ；多糖 206 nm。

6、柱子有色素如何去除？
答：色素性质很复杂，可以根据填料的耐受情况，优先尝试NaOH 清洗，另外，也可以使用有机溶剂（如 30% 异丙醇或乙醇），*后再尝试酸，如 0.01 M HCl（需要确认填料耐受性）。如果去除不掉，可以定期把色素污染部分的填料去除。

以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于蛋白纯化通用问题（一）。
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